这个谜语“一双之后又一双，勤恳劳作无怨言”所指的生肖是牛。

详解如下：

1、谜语解析：

- “一双之后又一双”：这里可以理解为有两个“一双”，即四只脚，在十二生肖中，大部分动物都是四只脚，但结合后一句“勤恳劳作无怨言”，我们可以进一步缩小范围。

- “勤恳劳作无怨言”：这句话形象地描绘了某种动物勤劳、任劳任怨的特点，在十二生肖中，牛是众所周知的勤劳动物，经常与农耕、劳作等联系在一起。

2、生肖牛的特点：

勤劳：牛是农耕社会的重要劳动力，它们默默无闻地耕田、拉车，为人类提供了巨大的帮助。

任劳任怨：牛在工作中通常不会抱怨或偷懒，总是尽职尽责地完成自己的任务。

坚韧不拔：牛的性格中还有一种坚韧不拔的精神，无论遇到多大的困难，它们都会坚持不懈地努力。

象征意义：在文化中，牛还常常被视为勤劳、诚实、稳重和可靠的象征。

这个谜语通过描述一种勤劳且任劳任怨的动物来暗示生肖牛，牛作为十二生肖之一，不仅具有独特的形象特征，还承载着丰富的文化内涵和象征意义。